Genul Staphylococcus

Genul Staphylococcus

Stafilococi coagulazo-pozitivi: S. aureus

Stafilococi coagulazo-negativi (SCN) cu importanta clinica: S. lugdunensis, S. schleiferi, S. epidermidis, S.haemolyticus, S. saprophyticus.

Produse patologice

portaj: secretie din cavitatea nazala anterioara, secretie faringiana, probe de pe 656c26g tegumente (zona axilara, perianala)

plagi, otite, infectii tegumentare Þ puroiul (S. aureus)

infectii urinare Þ urina (S. saprophyticus, S. aureus)

infectii gastro-intestinale, toxiinfectii alimentare Þ materii fecale, vomismente, alimente.

meningite LCR

septicemie, febra puerperala, sange pt hemocultura (S. aureus, SCN)

pneumonie, sputa.

infectii nosocomiale - S. aureus meticilino-rezistent (MRSA, SARM),

SCN meticilino-rezistent-(MRS)

S. aureus intermediar vancomicina (VISA)

S. aureus rezistent la vancomicina ( VRSA)

Recoltare produs patologic

Examenul macroscopic: puroi cremos, filamentos, galbui.

Examenul microscopic direct = frotiu din produsului patologic (pp)

• coloratia Gram: coci Gram pozitivi, dispusi in gramezi asemanatoare ciorchinilor de strugure
• coci Gram pozitivi localizati intra si perileucocitar; prezenta celulelor inflamatorii este dovada ca s-a recoltat un produs patologic real, de la nivelul infectiei

Insamantarea pp

• se insamanteaza in poligon deschis ( fara o latura) - pe medii solide, in scopul obtinerii coloniilor microbiene izolate: geloza-sange sau Columbia -sange, mediul Chapman
• se insamanteaza si in mediu lichid de imbogatire - BHI

Incubare aeroba la 37°C, 18 - 24 ore.

Identificarea bacteriei:

• Caractere morfotinctoriale: frotiu din cultura pura : coci Gram pozitivi, in gramezi.
• Caractere de cultura: colonii "S" pigmentate sau nepigmentate ( medii solide)

Medii lichide- tulbura uniform bulionul cu depozit moderat la fundul tubului

Producerea de hemolizine - pe geloza-sange

• hemoliza beta (S. aureus,) datorata hemolizinei alfa
• nu prezinta hemoliza (majoritatea tulpinilor SCN)

Descompunerea manitolului pe mediul Chapman (manito-pozitiv, colonii galbene, S. aureus)

• Caractere biochimice

Testul catalazei

Diferentiaza coloniile de staphylococ de cele de streptococ.

Deoarece ambele bacterii cresc pe mediu cu sange se recomanda folosirea doar a varfurilor coloniilor de stafilococ sau streptococ pentru a evita reactii fals pozitive datorita catalazei eritrocitare(din mediu cu geloza -sange).

Pe o lama de microscop depune 1-2 picaturi de H₂O₂ ^, peste picatura de reactiv se adauga coloniile testate.

Citire si interpretare

• Test pozitiv-aparitia bulelor de gaz pana la efervescenta
• Test negativ-absenta bulelor

Reactia oxidazei este negativa

Identificarea Staphylococcus aureus

Se face prin testul coagulazei pe lama , stafilococul auriu fiind producator de coagulaza. Pe o lama de microscop se pune o picatura de plasma (provenita din laboratorul de hematologie). In picatura se omogenizeaza cu grija o ansa din cultura pura a bacteriei de identificat. Omogenizarea se continua imprimand lamei miscari de rotatie.

Citire si interpretare

• Test pozitiv-aparitia de grunji, care lasa picatura limpede inseamna reactie pozitiva.
• Test negativ- amestecul ramane omogen;Orice reactie negativa se continua cu testarea coagulazei in tub.

• coagulaza libera pozitiv: S. aureus;
• coagulaza libera negativ: stafilococi coagulazo-negativi (SCN)

Fermenteaza glucoza, manitolul, lactoza, zaharoza etc. cu producere de acid

Truse API de identificare

Tipizarea bacteriilor pentru identificarea sursei de infectie, compararea tulpinilor izolate

• prin lizotipie (determinarea sensibilitatii stafilococului fata de bacteriofagi;)
• prin metode de biologie moleculara

Antibiograma - testeaza sensibilitatea tulpinilor izolate

Mediul Muller Hinton, inocul 0.5 MFarland, temp 35 C, incubare 18 pana la 24 ore

Alegerea discurilor pentru testarea sensibilitatii prin metoda difuzimetrica, interpretarea rezultatelor conform Performance standards for antimicrobial susceptibility testing;

CLSI ( anterior numit NCCLS)