SERIA ERITROCITARĂ
1. Determinarea vitezei de sedimentare a hematiilor
2. Determinarea rezistentei osmotice a eritrocitelor
3.Determinarea hematocritului
4.Dozarea hemoglobinei
5.Numarul normal de eritrocite
6.Constante eritrocitare: VEM, CHEM
7.Examenul frotiului de sânge periferic
8.Numararea reticulocitelor
1. DETERMINAREA VITEZEI DE SEDIMENTARE A HEMATIILOR (VSH) PRIN METODA WESTERGREEN
Principiu: Hematiile se sedimenteaza in vitro din sângele tratat în prealabil cu un anticoagulant.
Materiale necesare:
Tehnica:
Erori de tehnica:
Interpretarea rezultatelor:
-Valori normale: ♂: 1-10 mm/h 7-15 mm/2h
♀: 1-13 mm/h 12-17 mm/2h
copii: 1-11 mm/h 9-12 mm/2h
-VSH creste: a.) fiziologic: sarcina
Factori care influenteaza VSH-ul:
DETETRMINEARE REZISTENŢEI OSMOTICE A ERITROCITELOR
Principiu:
-Valori normale:
3.DETERMINAREA HEMATOCRITULUI
Definitie:
Hematocritul reprezinta fractia elementelor figurate din volumul total de sânge.
Indicatii:
Permite aprecierea starii de anemie respectiv poliglobulie.
Principiul metodei
Tehnica:
-Sângele se recolteaza prin înteparea pulpei degetului sau a lobului urechii în capilare heparinziate pâna la 4/5 din din lungime.
-Se astupa capatul cu plastilina.
-Se introduc în centrifuga cu capatul liber spre ax, asezate simetric pentru echilibrare.
-Centrifugare 3-4 minute la peste 10 000 rotatii/ minut.
-Citirea rezultatului se face dupa o nomograma.
Interpretarea rezultatului:
Valori normale: ♀: 40 ± 5 %
Metode de dozare ase hemoglobinei:
4.1. Dozarea hemoglobinei ca oxihemoglobina
4.2. Dozarea fotometrica a hemoglobinei ca cianhemiglobina si cianmethemoglobina
4.3. Dozarea spectrofotometrica a hemoglobinei
4.4. Dozarea electroforetica a hemoglobinei
4.1. Dozarea hemoglobinei ca oxihemoglobina:
Principiul metodei:
Solutia diluata de amoniac produce hemoliza sângelui si totodaata împiedica transformarea hemoglobinei în methemoglobina. Oxihemoglobina se dozeaza în functie de densitatea optica a solutiei la 540 nm(filtru verde).
Tehnica:
0,02 ml sânge se omogenizeaza cu 5 ml solutie hidroxid de amoniu 0,1%. Se citeste extinctia amstecului si se calculeaza concentratia hemoglobinei prin interpolare pe curba de calibrare.
Valori normale:
♂: 13 - 17 g/ 100ml
♀: 12 - 15 g/ 100ml
4.2. Dozarea fotometrica a hemoglobinei ca cianhemiglobina si cianmethemoglobina:
Aceasta determinare este metoda standard pe plan mondial pentru dozarea hemoglobinei.
Principiul metodei:
Fericianura de potasiu oxideaza fierul feros din hemoglobina în fier feric, iar acesta face ca toate felurile de hemoglobina sa se transforme îm methemoglobina sau hemiglobina, care pe masura ce se formeaza, se tranforma în cianmethemoglobina sau cianhemiglobina, care se vor doza fotometric.
Tehnica:
0,02 ml sânge venos sau capilar se amasteca cu 5 ml reactiv Kampen-Zylstra, se omogenizeara si se lasa în repaus 30 de minute. Extinctia se va citi la 540 nm. Concentratia hemoglobinei se calculeaza prin interpolare pe curba de calibrare.
4.3. Dozarea spectrofotometrica a hemoglobinei:
Aceast este o metoda cantitativa de dozare a hemoglobinei.
Principiul metodei:
Derivatii hemoglobinei, fiind substante colorate (prin componenta porfirinica), pot fi usor deosebite prin spectrul lor de absorbtie.
Derivatii hemoglobinei:
a) HbO2 (oxihemoglobina): are doua spectre de absorbtie în zona galben-verde (570-545nm). Reprezinta 97% din hemoglobina în sângele arterial si 70-75% în sângele venos.
b) HbH (hemoglobina redusa)
c) HbCO (carboxihemoglobina):în mod normal reprezinta 0,5-2% din hemoglobina, iar la fumatori în jur de 6.5%.
d) MetHb : în mmod normal reprezinta 0,2-1%.
e) HbCO2 (carbhemoglobina), concentrtia acestuia variaza în limite largi, este mai mare în sângele venos si mai mic în sângele arterial.
4.4. Dozarea electroforetica a homoglobinei:
Principiul metodei:
Hemoglobina si derivatii sai migreaza în câmp electrostatic, datorita componentei lor proteice. În comparatie cu proteinograma efectuata din plasma, la proteinograma efectuata din ser hemolizat apar benzi în plus în fractiunile în care migreaza diferitele tipuri de hemoglobina, în special în β2. Concentratia hemoglobinei se poate determina densitometric.
Tipuri de hemoglobina:
a) HbA1: migreaza în fractiunea α2, β2 si reprezinta 96-98 % din hemoglobina.
b) HbA2: migreaza în fractiunea α2, δ2, reprezinta 1-3% din hemoglobina.
c) HbF: migreaza în fractiunea α2, γ2 si reprezinta 0,5- 0,8% din hemoglobina.
Valori normale: ♂: 4.500.000 - 5.000.000/mm3
♀: 4.200.000 - 4.500.000/mm3
nou nascuti: 5.000.000 - 6.000.000/mm3
Anemie: ♂: < 4.500.000/mm3
♀: < 4.000.000/mm3
VEM > m = macrocitoza (megalocitoza)
Constanta de culoare CHEM (concentratia de Hb eritrocitara medie)
7. EXAMENUL FROTIULUI DE SÂNGE PERIFERIC
Frotiu periferic se studiaza dupa colorare cu colorant May - Grünwald - Giemsa.
Se vor urmarii:
Interpretarea rezultatului:
-vârf = diametrul eritrocitar mediu (DEM)
-baza = grad de variatie a diametrului eritrocitar (anizocitoza)
Patologic:
a.) Devierea la stânga: vârful curbei la 6 m se numeste microcitoza.
b.) Devierea la dreapta: vârful curbei la 9 m este macrocitoza.
icter hemolitic congenital
anemia Cooley
c.)Anizocromie (eritrocitonormocrome si hipocrome)
anemii grave regenerative
7.4.Prezenta sau absenta incluziunilor celulare:
Corpusculii intraeritrocitari cel mai frecvent întâlniti sunt:
Corpusculii Heinz: granule mici rotunde, asezate la periferia celulei. Se coloreaza cu albastru de Nil.
intoxicatii cu substante methemoglobinizante
Corpusculii Jolly: resturi de cromatina nucleara cu aspect rotund.
anemii grave în special megaloblastice
Inele Cabot: formatiuni subtiri, filamentoase în forma de inel sau de cifra 8.
anemii grave din neoplasme, anemii aplastice
Valori normale: 5-15% sau 20.000 - 80.000/mm3
-Cresterea numarului de reticulocite: înseamna hiperreactivitate medulara:
anemii hemolitice
anemii posthemoragice
tratament eficient cu Fe, B6, B12.
-Scaderea numarului de reticulocite: Înseamna inhibitie medulara:
anemii hipo sau aregenerative.
|
